陕西依科生物技术服务有限公司的服务项目有:成都病理技术服务、成都HE染色、成都HE染色等。同时,公司还建立了独立实验室,主要从事病理技术服务工作,包括组织处理、切片和染色等。欢迎有需要的客户来电咨询,咨询热线:18966928535 咨询热线:13572593771

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成都Western blot原理及实验流程

发布日期:2021-4-28 10:15:00来源:http://cd.sxyksw.com/news602495.html

详细介绍

陕西依科生物技术服务有限公司的服务项目有:成都病理技术服务、成都HE染色、成都HE染色等。同时,公司还建立了独立实验室,主要从事病理技术服务工作,包括组织处理、切片和染色等。欢迎有需要的客户来电咨询,咨询热线:18966928535

一、Western blot原理及应用

WB是一种把电泳分离的成都蛋白组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,而后采用抗体作为探针进行特定蛋白检测的技术。

WB主要应用:对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析,旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。

依科生物WB服务内容:从蛋白提取开始,进行电泳转印、封闭、抗体孵育及ECL发光,最终进行基于图像灰度值的定量分析。

依科生物提供的实验报告中包括实验基本流程、蛋白定量原始数据、抗体孵育方式、图像灰度值分析及曝光原始图像。

二、Western blot实验流程

1、样本制备:蛋白提取、定量及变性。

2、电泳转印:蛋白SDS-page凝胶电泳后将蛋白转印至PVDF膜或者NC膜

3、封闭:使用封闭液封闭PVDF膜上未结合蛋白的小孔。

4、抗体孵育:一定条件下使一抗与目标蛋白结合,二抗与一抗结合。

5、发光成像:使用化学发光成像进行条带显色。

6数据处理:使用imageJ分析图像灰度值。

三、实验结果展示:


四、您需要提供的信息及物质

1、样本种属和指标名称

2、抗体,包括货号及说明书

3、实验样本

未用完的样本和抗体可以返还

五、样本收集和运输

1、组织样本

收集: 取材应在冰上进行,取材后组织用生理盐水冲洗干净,去除血渍和污物,并剔除非研究所需的组织;

保存:吸干水渍并切小块,放入已标记的冻存管中,液氮速冻后,转运至-80℃冰箱,可以保存半年左右;

运输:使用大体积干冰运输;

2、细胞样本

贴壁收集:细胞培养或处理结束后,去除培养液,用预冷的PBS缓冲液快速冲洗细胞以去除培养基,而后加入少量预冷的PBS,使用细胞刮刀将细胞刮下,移于1.5ml离心管中,4℃1500rpm离心去除上清;得到的沉淀为细胞样本。

悬浮细胞:细胞培养或处理结束后于4℃1500rpm离心去除上清培养基,加入预冷PBS轻柔吹打重悬细胞并转移至1.5ml离心管中,4℃1500rpm离心去除上清PBS以洗去培养基,洗涤操作需要重复一次。最后离心得到的沉淀为细胞样本。

保存:液氮速冻后于-80 ℃冰箱中保存,可以保存半年左右。

运输:使用大体积干冰运输;

3、特殊样本:植物、细菌或者做过特殊处理的样本需要联系客服进行沟通。


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